在微生物实验室中,培养平板是不可或缺的工具。它们不仅用于细菌的分离与纯化,还是进行微生物初步识别与鉴定的关键。为了有效利用这些平板,我们必须首先了解它们的成分、用途以及如何通过细菌的染色特征、形态特征等进行初步判断。接下来,我们将介绍几种常用的培养平板。
.基础培养基基础培养基,如营养肉汤和营养琼脂,提供给细菌生长所需的基本营养成分。这类培养基可广泛应用于多种细菌的培养。
2.增菌培养基针对某些具有特殊营养需求的细菌,我们可以配制增菌培养基。这些培养基中添加了特定生长因子或微量元素,以促进这些细菌的生长。例如,链球菌和肺炎链球菌需要在含有血液或血清的培养基中生长。此外,还有选择性增菌培养基,它们不仅提供必要的营养成分,还添加了特殊抑制剂,以利于目的菌的生长。
3.选择培养基选择培养基中加入的化学物质能抑制某些细菌的生长,同时促进其他细菌的生长,从而实现对目标细菌的分离。例如,SS琼脂用于肠道致病菌的培养,其中的胆盐能抑制革兰阳性菌,而枸橼酸钠和煌绿则能抑制大肠埃希菌,使得致病的沙门菌和志贺菌更易分离。
4.鉴别培养基鉴别培养基则用于进一步对细菌进行鉴别。它们通过特定的化学指示剂或生长特征来区分不同类型的细菌。这种培养基的种类繁多,每种都针对特定的细菌类型或特性进行设计。用于培养和区分不同细菌种类的培养基被称为鉴别培养基。这类培养基通过利用细菌分解糖类和蛋白质能力的差异及其代谢产物的不同,加入特定的作用底物和指示剂来进行鉴别,且通常不添加抑菌剂。通过观察细菌在培养基中的生长情况以及对底物的作用效果,可以有效地鉴别出不同类型的细菌。例如,常用的糖发酵管、三糖铁培养基以及伊红-亚甲蓝琼脂等都是鉴别培养基的典型代表。此外,还有一些培养基将选择和鉴别功能相结合,既能在选择过程中起作用,又能进行一定的细菌鉴别。例如,SS琼脂中加入的底物乳糖和指示剂中性红就具有这样的功能。
接下来,我们介绍另一种特殊的培养基——厌氧培养基。这种培养基专为厌氧菌的分离、培养和鉴别而设计。它含有丰富的营养成分、特殊生长因子,并具有较低的氧化还原电势。此外,还加入了亚甲蓝作为氧化还原指示剂。培养基中的中心脑浸液和肝块、肉渣等成分能吸收培养基中的氧气,而硫乙醇酸盐和半胱氨酸则是强大的还原剂。同时,维生素K氯化血红素等成分能促进某些类杆菌的生长。常用的厌氧培养基包括庖肉培养基、硫乙醇酸盐肉汤等,并在液体培养基表面覆盖一层凡士林或液状石蜡以隔绝空气。
最后,我们还将简要介绍哥伦比亚血平板。这种培养基在微生物实验室中也有着广泛的应用。
用途麦康凯平板(MAC)是一种非选择性培养基,适用于各类细菌的生长。它特别适合用于一般检验标本中细菌的分离,但需要注意的是,一些营养要求较高的细菌,如嗜血杆菌,可能无法在其上生长。
原理该培养基中包含了多种成分,如酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物和心胰酶消化物,它们共同提供必要的碳氮源、维生素和氨基酸。此外,淀粉的加入不仅有助于促进奈瑟氏菌的生长,还能增强链球菌的溶血特性。氯化钠的存在则确保了渗透压的均衡,而琼脂则作为培养基的凝固剂,使其具有适当的凝固度。
用途:麦康凯平板(MAC)不仅是一种非选择性培养基,还具有一定的弱选择性,这使得它特别适用于肠道致病菌的分离培养以及非发酵细菌的鉴别。肠道致病菌,如沙门氏菌、志贺氏菌和致泻性大肠杆菌,在这类培养基上能够得到有效的分离。同时,非发酵细菌,如假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属和产碱菌属等,也能在此得到很好的鉴别。通过观察菌落形态和颜色的差异,我们可以选取可疑菌落,并进一步通过生化试验和血清凝集试验来鉴定细菌的种类。
原理:麦康凯平板的成分包括蛋白胨,它提供了必要的碳氮源、维生素和生长因子,以支持细菌的生长。牛胆盐的加入则有效地抑制了革兰氏阳性菌的生长,使得培养基更具选择性。同时,氯化钠的存在维持了均衡的渗透压,确保了细菌生长环境的稳定性。此外,乳糖作为可发酵的糖类,为细菌提供了能量来源。而中性红作为pH指示剂,在细菌发酵乳糖产酸时,菌落会呈现粉红色,并在菌落周围形成胆盐沉淀的浑浊圈,这一特征可用于初步鉴别细菌。最后,琼脂作为培养基的凝固剂,确保了培养基的适当凝固度。
用途:非选择性培养基,特别添加了V和X因子,使其成为分离和培养奈瑟菌属、嗜血杆菌等苛氧菌的理想选择。相较于血平板,它提供了更为丰富的营养环境。
原理:该培养基包含蛋白胨和牛肉浸出粉,这些成分不仅提供了必要的氮源、维生素和生长因子,还为细菌的生长创造了适宜的环境。同时,氯化钠的作用是维持培养基中的渗透压,确保细菌生长的稳定性。此外,琼脂作为凝固剂,使得培养基具有适当的凝固度,便于细菌的生长和观察。特别值得一提的是,脱纤维羊血中含有的氯化血红素和辅酶I,为嗜血杆菌属的生长提供了不可或缺的特殊营养。
用途:专为嗜血杆菌和奈瑟菌属等细菌的分离而设计。
原理:由于万古霉素能有效抑制大多数革兰氏阳性菌的生长,因此该培养基主要促进革兰氏阴性菌的繁殖。通过与血平板的细菌生长情况相比较,可以更准确地识别出嗜血杆菌和奈瑟菌。
用途:专为分离和培养临床粪便标本中的沙门氏菌和志贺氏菌而设计。这两种细菌是引发肠道腹泻的主要病原菌,可能导致细菌性痢疾、伤寒以及副伤寒甲、乙、丙病等严重疾病。通过SS培养基,我们可以观察到菌落形态和颜色的变化,从而挑选出可疑致病菌,并进一步通过生化试验和血清凝集试验进行鉴定。
原理:SS培养基中包含的蛋白胨和牛肉浸出粉提供必要的氮源、维生素和生长因子,促进细菌的生长。柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠以及煌绿的协同作用,能有效抑制肠道中的非病原性细菌和部分大肠杆菌的生长,但对志贺菌属和沙门菌属的抑制性相对较弱。硫代硫酸钠有助于大肠菌的着色,而柠檬酸铁则能缓解某些药物对病原菌的毒副作用,并与细菌产物反应生成黑色菌落。中性红指示剂用于区分分解乳糖和未分解乳糖的细菌,前者呈现红色菌落,后者则为无色。最后,琼脂作为培养基的凝固剂,确保了培养环境的稳定性。
用途:MH琼脂培养基常用于纸片扩散法抗生素敏感试验,这是临床药敏试验中的一种重要方法。纸片法操作简便,不仅被WHO推荐,还是临床实验室的常用技术。
原理:培养基中的牛肉粉和酸水解酪蛋白为细菌提供必需的氮源、维生素及氨基酸。同时,可溶性淀粉能有效吸收细菌代谢产生的有毒物质。而琼脂则作为凝固剂,确保培养环境稳定。
用途:MH琼脂培养基不仅常用于纸片扩散法抗生素敏感试验,还特别适用于分离培养医学领域中常见的革兰阴性细菌。
原理:培养基中蕴含的中国蓝与玫红酸成分,充当着酸碱指示剂的角色。在碱性环境下,中国蓝保持无色透明,而玫红酸则呈现红色;相反,当处于酸性环境时,两者颜色互换。由于沙门菌和志贺菌无法发酵乳糖,它们的菌落在培养基上仍保持原色——淡紫红色,且呈现出半透明的质感。相比之下,大肠菌群则能分解乳糖并产生酸性物质,因此其菌落呈现出蓝绿色,中心部分更是深蓝色。
用途:该产品专为分离培养肠道致病菌及大肠菌群而设计。
原理:其成分中的伊红作为酸性指示剂,而美蓝则为碱性指示剂。当大肠杆菌在分解乳糖过程中产生酸性物质时,细菌会被染上红色,并与美蓝结合,从而形成具有紫黑色且带有绿色金属光泽的菌落。相比之下,无法分解乳糖产酸的细菌则不会着色,伊红与美蓝无法结合,因此沙门氏菌和志贺氏菌等会呈现出无色或琥珀色半透明的菌落特征。
特点:伊红美蓝不仅可用于大肠埃希菌和产气杆菌的鉴别,还能迅速鉴定出白色念珠菌及凝固酶阳性的葡萄球菌。
用途:该产品专为分离和培养真菌及酵母样真菌而设计。其原理在于,培养基中包含的抗生素能够有效抑制其他细菌的生长,同时,高浓度的葡萄糖、麦芽糖、淀粉以及适宜的酸性条件共同促进真菌的生长。
血琼脂培养基:
用途:该培养基广泛应用于医学领域,主要用于增菌培养各种常见的致病菌,并可用于微生物溶血性试验。其原理在于,羊血作为一种优质的营养物质,能够有效地促进细菌的生长与繁殖。
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